Tirzepatide-onzuiverheden

Tirzepatide-onzuiverheden|Tilpeptide-onzuiverheidscontrole|Onzuiverheid Aangepaste synthese en structuurbevestiging|Wetenschap-Peptide

Controle van Tirzepatide-onzuiverheden - voor GLP-1/GIP dual-doelonderzoek naar de kwaliteit van geneesmiddelen, rapportage van generieke geneesmiddelen. Wetenschap-Peptide biedt aangepaste synthese van tilpeptide-gerelateerde onzuiverheden, waaronder deletiepeptiden, geoxideerde onzuiverheden, exfoliatieproducten van vetzuren, dimeren, enz., met structurele bevestigingsgegevens ter ondersteuning van uw onderzoek. Wij kunnen uw onzuiverheidsspectroscopieonderzoek ondersteunen met structurele bevestigingsgegevens. Welkom om contact met ons op te nemen.

Tirzepatide (Tirzepatide) is de dubbele GLP-1/GIP-agonist waarmee Eli Lilly op de proppen kwam, en deze is de afgelopen twee jaar in volle gang. Het heeft een goed effect op het verlagen van suiker en een sterk effect op het verminderen van gewicht, en wordt de verbeterde versie van "het wondermiddel voor gewichtsverlies" genoemd. Velen staren ernaar bij binnenlandse fabrikanten van generieke peptidegeneesmiddelen - wie na het verstrijken van het patent als eerste de kwaliteit van het onderzoek kan doornemen, wie de kans krijgt om de eerste generieke stof te bemachtigen.

 

De kwaliteit van tilpeptide is echter niet zo eenvoudig te bestuderen. Het is complexer dan simethicon, met 39 aminozuren, een vetzuurzijketen (eicosaandizuur) en een linker. De onzuiverheden die tijdens het syntheseproces kunnen verschijnen, zijn veel hoger dan die van gewone peptiden. Ontbrekende peptiden, oxidatieve onzuiverheden, vetzuurafscheidende producten, dimeren, linker-gerelateerde onzuiverheden moeten allemaal onder controle worden gehouden, ze moeten allemaal helder zijn.

 

We hebben veel ervaring opgebouwd met de synthese van complexe peptide-onzuiverheden. We hebben ons gespecialiseerd in de studie van tilpeptide en we weten wat de problemen zijn met betrekking tot het onzuiverheidsprofiel ervan en wat de essentiële controlepunten zijn. We kunnen de synthese van verschillende tilpeptide-onzuiverheidscontroles aanpassen aan uw behoeften, met structuurbevestigingsgegevens, en u helpen de methode vast te stellen, zodat de kans kleiner is dat u een aanvulling krijgt bij de indiening.

De moleculaire structuur van tilpeptide bepaalt dat het onzuiverheidsprofiel veel complexer is dan dat van algemene peptiden. Wanneer we onzuiverheidsonderzoeken doen, richten we ons vooral op deze categorieën:

Ontbrekend peptide
De 39 aminozuren, waarvan er één wordt gemist tijdens het syntheseproces, zijn een onzuiverheid. De retentietijden van de ontbrekende peptiden op HPLC waren wijd verspreid, met verschillende polariteit van de ontbrekende peptiden op verschillende posities. Sommige ontbreken aan het N--uiteinde, sommige in het midden en sommige nabij de vetzuuraanhechtingsplaats. We hebben van een klant een bestelling ontvangen voor 15 ontbrekende peptiden in verschillende posities om alle mogelijke ontbrekende onzuiverheden in hun proces te lokaliseren.

Oxiderende onzuiverheden
Ontmoet in de volgorde van tilpeptide is gevoelig voor oxidatie tot sulfoxide en vervolgens tot sulfon. Geoxideerde onzuiverheden komen vaak naar voren in stabiliteitsstudies en groeien na verloop van tijd. We hebben een vergelijking gemaakt: onder versnelde omstandigheden gedurende een maand kan de oxidatiepiek zonder controle oplopen tot meer dan 0,3%.

Producten voor het afstoten van vetzuren
Dit is een onzuiverheid die uniek is voor tilpeptide. De vetzuurzijketen (eicosaandizuur) is via een linker aan lysine gehecht, en deze modificatie kan tijdens de synthese of opslag gedeeltelijk worden losgelaten, waardoor het vetzuur -onzuiverheden verwijdert. Problematischer is dat de afscheiding kan plaatsvinden op verschillende locaties - tussen het vetzuur en de linker, of tussen de linker en het peptide -, wat resulteert in verschillende onzuiverheden. We hebben verschillende vetzuur-gerelateerde onzuiverheden voor onze klanten gesynthetiseerd, variërend van volledige verlies tot slechts een klein gedeelte.

Dimeren/polymeren
Twee of meer tilpeptidemoleculen clusteren samen om een ​​dimeer of hoger te vormen. Het molecuulgewicht van het dimeer is tweemaal dat van de hoofdpiek, en het is vaak een brede piek op HPLC, dus het moet speciaal worden gescheiden en gezuiverd voordat het als controle kan worden gebruikt. We hebben de bereiding van dimeren gedaan en er waren verschillende zuiveringsronden nodig om een ​​zuiverheid van meer dan 95% te bereiken.

Linker-gerelateerde onzuiverheden
De vetzuurmodificatie van tilpeptide maakt gebruik van een linker (bijv. -Glu, PEG, enz.), en deze linker zelf kan tijdens de synthese nevenreacties veroorzaken, waardoor onzuiverheden ontstaan ​​met ontbrekende of onvolledige linkers. Dit soort onzuiverheid wordt niet aangetroffen in gewone peptiden, maar is uniek voor tilpeptide, dat specifiek moet worden bestudeerd.

Gedeamideerde onzuiverheden
Asparagine (Asn) en glutamine (Gln) worden gemakkelijk gedeamideerd onder zure of verhittingsomstandigheden, wat resulteert in isomeren. Er zijn verschillende Asn en Gin in de sequentie van tilpeptide, en de deamideringsonzuiverheid komt vaak voor in de geforceerde afbraaktest, dus het controleproduct moet worden gebruikt om de onzuiverheid te lokaliseren.

Diastereo-isomeren
Tijdens de langeketensynthese kunnen individuele aminozuren racemisatie ondergaan, resulterend in diastereo-isomeren. Het gehalte aan dit soort onzuiverheden is meestal niet hoog, maar experts zullen vragen bij het declareren, en het is beter om een ​​controleproduct ter bevestiging te hebben.

Veel van deze onzuiverheden kunnen niet worden gekocht en moeten op maat worden gesynthetiseerd. We hebben veel projecten gedaan op het gebied van de aanpassing van tilpeptide-onzuiverheden, die alle bovengenoemde categorieën omvatten.

De verwijdering van de peptidereeks
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, met MS- en NMR-bevestiging. We hebben een reeks peptiden gesynthetiseerd met een afstand van 5 aminozuren van N--terminaal tot C--terminaal.

Oxiderende onzuiverheden
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95% en we kunnen het LC-MS-spectrum leveren om de mate van oxidatie te bevestigen. Sulfoxide en sulfon worden gescheiden door HPLC, en we kunnen beide doen.

Producten voor het afstoten van vetzuren
Dit is een van de moeilijkste onzuiverheden om mee te werken in tilpeptide. De vetzuurketen kan geheel of gedeeltelijk uitgeschakeld zijn (de laatste paar koolstofatomen ontbreken bijvoorbeeld). We kunnen een reeks varianten synthetiseren voor verschillende posities in de keten. In een van de meest gecompliceerde projecten die we hebben gedaan, vroeg de klant ons om een ​​onzuiverheid te synthetiseren waarbij 8 koolstofatomen ontbraken in de vetzuurketen, en het kostte ons twee maanden om het goed te doen.

Dimeer
Dimeren gevormd door cross{0}}verknoping of niet-covalente interacties kunnen met verschillende methoden worden bereid en geïsoleerd en gezuiverd om controles met een hoge zuiverheid te verkrijgen. Dimeren zijn moeizaam te zuiveren, maar we hebben de ervaring om te weten hoe we de monomeren moeten scheiden.

Linker-gerelateerde onzuiverheden
De linker (-Glu, PEG, enz.) kan ontbreken of onvolledig zijn, wat resulteert in een reeks gerelateerde onzuiverheden. We kunnen verschillende varianten synthetiseren met ontbrekende linkers, verkorte linkers of niet-overeenkomende linkers, en u helpen de spectra van dergelijke onzuiverheden op te bouwen.

Gedeamideerde onzuiverheden
Voor de Asn- en Gin-plaatsen in de sequentie kunnen we gedeamideerde onzuiverheidscontroles voorbereiden door geforceerde afbraak of gerichte synthese. Het verschil in molecuulgewicht na deamidering is slechts 1, wat niet gemakkelijk te onderscheiden is door MS, dus gebruiken we meestal NMR of speciale chromatografische omstandigheden om dit te bevestigen.

Andere aangepaste onzuiverheden
Als u tijdens uw onderzoek een nieuwe onbekende onzuiverheid aantreft, kunnen wij u helpen de structuur te analyseren en te synthetiseren. Stuur ons de monsters, we zullen LC-MS-analyse uitvoeren, de structuur afleiden, vervolgens directionele synthese volgen en vervolgens de retentietijd en het massaspectrum vergelijken om de overeenkomst te bevestigen. We hebben dit proces vele malen gedaan en het succespercentage is vrij hoog.

Ontwikkeling en validatie van analytische methoden
Bij het opzetten van een HPLC- of LC-MS-methode is een onzuiverheidscontrole vereist voor lokalisatie, bepaling van scheiding, verificatie van lineair bereik en herstel. Zonder de controle mist de methodevalidatie een stukje. Veel klanten vragen ons om eerst een paar belangrijke onzuiverheden te verwijderen om de methode op te zetten, en dan langzaam de rest op te lossen.

Heterogene massaspectrometrie
Wanneer een generiek geneesmiddel wordt aangegeven, is een uitgebreide kwalitatieve en kwantitatieve analyse van procesonzuiverheden en afbraakproducten vereist. De locatie, inhoud en structuur van elke onzuiverheid moeten worden bevestigd door een controleproduct. We hebben gezien dat de verklaring van de informatie werd verzonden om in te vullen, negen van de tien keer werden de onzuiverheden van dit stuk niet begrepen.

Stabiliteitsstudies
Bij stabiliteit op de lange- termijn en versnelde tests is het noodzakelijk om te bepalen welke degradatieproducten dominant zijn en wat de trend in de inhoud is. Met de onzuiverheidscontrole kunnen we nauwkeurig kwantificeren en monitoren. Een klant deed de stabiliteit van de tilpeptidebereiding en ontdekte dat een degradatiepiek erg snel groeide onder versnelde omstandigheden. Daarom analyseerden en synthetiseerden we deze door MS om de structuur te bevestigen, en vervolgens was de klant opgelucht om dit te melden.

Testen van batchvrijgave
Na commercialisering moet elke partij actieve farmaceutische stoffen of formuleringen worden getest op de betreffende stof. Controles op onzuiverheden zijn essentiële instrumenten voor het testen op vrijgave.

Informatie over declaraties van generieke geneesmiddelen
Onderzoek naar onzuiverheden vormt een belangrijk onderdeel van de indieningsinformatie. Het verstrekken van volledige onzuiverheidsprofilering en controlegegevens vermindert het risico op een beoordelingsvrijgave aanzienlijk.

Geval 1: een farmaceutisch bedrijf, generieke geneesmiddelenprogramma voor tilpeptide
Ze ontwikkelen een generieke versie van tilpeptide en hebben een complete set onzuiverheidscontroles nodig voor methodevalidatie. We hebben er twaalf onzuiverheden voor aangepast: vijf ontbrekende peptiden, twee geoxideerde onzuiverheden, één dimeer, twee producten die vetzuur afstoten en twee linker-gerelateerde onzuiverheden. Elk van hen heeft een zuiverheid van meer dan 95% en gaat vergezeld van MS- en NMR-gegevens. De projectleider zei: "De onzuiverheden van tilpeptide zijn twee keer zoveel als die van andere peptiden, maar je kunt ze allemaal maken en de gegevens zijn compleet, wat ons veel werk scheelt." Later werd de validatie van hun methode met succes afgerond en nu bereiden ze zich voor op de aangifte.

Case 2: Een CRO-bedrijf, onzuiverheidsprofilering
Ze voerden een kwaliteitsonderzoeksproject uit naar tilpeptide, waarvoor een uitgebreide analyse van procesonzuiverheden nodig was. Ze stuurden ons de ruwe peptidemonsters en we voerden LC-MS-analyse uit, leidden de mogelijke structuren van verschillende onbekende onzuiverheden af, synthetiseerden ze vervolgens op een gerichte manier, vergeleken retentietijden en massaspectra, en bevestigden vier nieuwe onzuiverheden, - waarvan er twee linker-gerelateerd waren, en twee ervan waren varianten van de afgifte van vetzuren. De klant gebruikte deze gegevens om de onzuiverheidsprofielen te verfijnen en slaagde met succes voor de acceptatie door de klant.

Case 3: Stabiliteitsstudies, een biotechnologiebedrijf
Ze onderzochten de stabiliteit van een tilpeptideformulering en ontdekten dat de hoeveelheid afbraakproduct snel toenam onder versnelde omstandigheden, maar ze wisten niet wat het was. We analyseerden het monster met LC-MS en gingen ervan uit dat het een deamidatie-onzuiverheid op een bepaalde Asn-locatie was, en synthetiseerden het vervolgens op een gerichte manier en bevestigden het door vergelijking. Ze stelden een test op met behulp van deze controle en volgden nauwkeurig de trend van het afbraakproduct. Later, toen ze het rapport indienden, werd dit deel van de gegevens door de experts benadrukt en vanwege de solide gegevens werd er geen compensatie verleend.

Tilpeptide is een populair product, maar onderzoek naar onzuiverheden is een delicate klus, vooral producten voor exfoliatie van vetzuren en linker-gerelateerde onzuiverheden, waar veel fabrikanten niet mee om kunnen gaan. Als u kwaliteitsonderzoek of generieke ontwikkeling van tilpeptide doet en onzuiverheidscontroles nodig heeft, neem dan gerust contact met ons op. We hebben veel werk verricht, we weten wat de moeilijkheden zijn en we weten hoe we er uit kunnen komen.